Нуклеиндик кислоталардын синтезинин принциптери

Нуклеин кислотасынын синтези катуу фазалык сиаликалык амид триглицерид ыкмасын колдонуу менен ишке ашырылат, мында ДНКнын 3′ учу катуу фаза субстратында кыймылсызданат жана керектүү ДНК фрагменти синтезделмейинче нуклеотиддер 3′ – 5′ багытында кошулат. .Бул ДНК синтезинен ДНК полимеразаны колдонуу менен айырмаланат.

Биринчи базанын 3′ учу синтез учурунда CPGде иммобилизацияланат, кийинки базанын 5′-OH ди-п-толил тритил DMT менен, негиздеги амин тобу бензой кислотасы жана 3′ менен корголот. -OH андан кийин аминфосфат кошулмасы менен активдешет.5 5′-ОН 1 базанын 1 негизи жана кийинки базанын 3′-OH фосфит триглицеридди түзөт, андан кийин ал йод менен оксидаланып, фосфат триглицеридине айланат, экинчи негиздеги коргоочу зат 5′-OH тарабынан алынып салынат. кийинки базаны кошуу аркылуу дихлорассус кислотасын кошуу DM циклдерин жана синтезден кийин 5′-ОН боюнча коргоочу алсыз кислота менен чыгарылат Фрагмент концентрацияланган аммоний гидроксиди менен катуу чайырдан ажыратылат, коргоочу базадан чыгарылат. ысытууда концентрацияланган аммоний гидроксиди менен аммоний гидроксиди чыгарылат, фрагмент вакуумда кургатылып, нуклеин кислотасы суюк хроматография же PAGE аркылуу тазаланат.

Олиго синтезинин кадамдары

Блоктоодон чыгаруу

The5 аягы DMT коргоочу топ TCA чечимди кошуу менен алынып салынат.

Активдештирүү

Активаторду олигонуклеотид мономери менен аралаштырып, активдүү олигонуклеотиддик мономер ортодогу затты түзүшөт.

Кошулуу

5-терминалдуу гидроксил тобу туруксуз фосфит триглицериддик байланышты пайда кылуу үчүн антигенерациялык конденсация реакциясында активдүү олигонуклеотиддин аралыгы менен реакцияга кирет.

Каптоо 

Жабуучу агенттин кошулушу конденсация реакциясына катышпаган ашыкча гидроксил топтору менен ацетилдештирүү жабуу реакциясын ишке ашырат.

кычкылдануу 

Курамында суу бар йод эритмеси туруксуз фосфиттик байланыштар менен кычкылдануу жолу менен реакцияга кирип, туруктуу фосфор кислотасынын триглицериддик байланыштарын пайда кылат.

Cyanoethyl Cleavage

Фосфат триглицериддик байланыштан цианэтил тобун алып салуу үчүн DEA эритмеси кошулган синтезден кийин нуклеиндик кислота продуктусу.

Cleaved & Коргоодон чыгаруу

Нуклеин кислотасынын фрагменттери концентрацияланган аммоний гидроксидинин эритмесин кошуу менен катуу фаза ташыгычтан ажыратылат жана андан кийин негиздердин суутек байланыштарынан коргоочу топторду алып салуу үчүн ысытылат.