Химиялык ДНК синтези катуу фазалуу синтез стратегиясына жана фосфорамидит химиясына негизделген.Биологиялык ДНК синтезинен айырмаланып, химиялык ДНК синтезиндеги материал 1-сүрөттө көрсөтүлгөндөй DMT (4, 4-диметокситритил) жана фосфорамидит менен модификацияланган дезоксирибоксид болуп саналат. ДНК синтези катуу таянычта ишке ашырылат (биз ар түрдүүОлиго синтези тилкеси), башкача айтканда, CPG (башкарылган тешикчелер айнек) жана PS (полистирол) жана бүт синтез бир жерде жүзөгө ашырылат.ДНК/РНК синтезаторуБиздин негизги жабдык болуп саналат, анын ар кандай модели бар, мисалы: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 ж. синтез цикли.Адатта синтез цикли төрт кадамды камтыйт, коргоону жок кылуу, бириктирүү, жабуу жана кычкылдануу (2-сүрөт).Коргоодон чыгаруу катуу таянычтагы DMT тобун же мурунку нуклеозиддеги 5' гидроксил тобун алып салуу үчүн коюлган, коргоону жоюу реагенти катары дихлорометандагы 3% трихлорассус кислотасы колдонулат.Андан кийин фосфорамидит менен модификацияланган дезоксирибоксидге активатордун, б.а. 5-этилтиотетразолдун же 4,5-дицианомидазолдун жардамы менен гидроксил тобун экспозицияга алып, фосфитетриэфирди (III) түздү жана Кошуу кадамын ишке ашырды.Каалоо кадамы кошулуу баскычында реакцияга кирбеген гидроксил тобун бөгөттөө, каалабаган кемтик ырааттуулугун азайтуу үчүн жүргүзүлөт.Акырында, туруксуз фосфитетриэстер (III) пиридиндин азыркы учурда оксидант катары йод менен химиялык туруктуу фосфортристерге (V) кычкылданат.
Синтезделген ДНК катуу таянычтан аминолиз жолу менен бөлүнүшү мүмкүн, фосфортристердеги 2-цианэтил менен корголгон топ жана нуклеобазадагы амид бир эле учурда бөлүнөт, стеллаждардагы синтез плиталары жана синтез колонналары түз реакциялык камерага жайгаштырылат. -ныкыКоргоочу жабдуулар.Чийки ДНК талап боюнча HPLC, электрофорез жана OPC тарабынан даярдалышы мүмкүн, биз сизге дагы камсыз кыла алабызТазалоочу жабдууларкийинки иштетүү үчүн.
Сүрөт 1. dA химиялык түзүлүшүBzфосфорамидит.
Сүрөт 2. Химиялык ДНК синтезинин механизми.
Посттун убактысы: 09-август-2022